本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其制備方法、使用方法。

背景技術(shù)：

綠蘿(學(xué)名:Epipremnum aureum)，屬于天南星科麒麟葉屬植物，大型常綠藤本，生長(zhǎng)于熱帶地區(qū)，常攀援生長(zhǎng)在雨林的巖石和樹干上，其纏繞性強(qiáng)，氣根發(fā)達(dá)，可以水培種植。

綠蘿是非常優(yōu)良的室內(nèi)裝飾植物之一，攀藤觀葉花卉。蘿莖細(xì)軟，葉片嬌秀。在家具的柜頂上高置套盆，任其蔓莖從容下垂，或在蔓莖垂吊過長(zhǎng)后圈吊成圓環(huán)，宛如翠色浮雕。這樣既充分利用了空間，凈化了空氣，又為呆板的柜面增加了線條活潑、色彩明快的綠飾，極富生機(jī)，給居室平添融融情趣。形態(tài)特征：綠蘿藤長(zhǎng)數(shù)米，節(jié)間有氣根，隨生長(zhǎng)年齡的增加，莖增粗，葉片亦越來越大。葉互生，綠色，少數(shù)葉片也會(huì)略帶黃色斑駁，全緣，心形。它的花語“守望幸?！币苍黾恿似淇捎^賞度。

環(huán)保學(xué)家發(fā)現(xiàn)，一盆綠蘿在8～10平方米的房間內(nèi)就相當(dāng)于一個(gè)空氣凈化器，能有效吸收空氣中甲醛、苯和三氯乙烯等有害氣體。綠蘿不但生命力頑強(qiáng)，而且在室內(nèi)擺放，其凈化空氣的能力不亞于常春藤和吊蘭。新鋪的地板非常容易產(chǎn)生有害物質(zhì)。由于綠蘿能同時(shí)凈化空氣中的苯、三氯乙烯和甲醛，因此非常適合擺放在新裝修好的居室中。

綠蘿還具有很好的藥用價(jià)值，具有活血散瘀的功效?？梢灾委煹驌p傷。

植物組織培養(yǎng)中要用到各種培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長(zhǎng)因子。

但是目前，還沒有專門適合于綠蘿組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，嚴(yán)重影響了對(duì)綠蘿這種經(jīng)典材料的研究。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖、瓊脂粉，以及第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.5-5.8；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/4，微量元素為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

在某些實(shí)施方式中，如權(quán)利要求1所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉分別滅菌，3-5℃保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二：第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基溶解，加入6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉溶液，制得愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

步驟三：將定容好的的培養(yǎng)基PH調(diào)到5.5-5.8。

步驟四：將配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌，制得第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

在某些實(shí)施方式中，所述步驟一中的滅菌方法為抽濾滅菌或高溫滅菌；滅菌完成后20-25℃放置。

在某些實(shí)施方式中，所述步驟三中高溫滅菌的溫度為121℃，滅菌時(shí)間為30min。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、6-糠基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂粉，以及第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.5-5.8；

第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸100mg/L、天冬氨酸50mg/L、谷氨酸200mg/L。

在某些實(shí)施方式中，所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為3.0mg/L、6-糠基氨基嘌呤0.1mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1mg/L、蔗糖20-30g/L、萘乙酸0.2mg/L、瓊脂粉7g/L。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的使用方法：將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段，將其接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成愈傷組織后接種于愈傷組織的繼代培養(yǎng)基中增殖獲得致密愈傷組織。

在某些實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)增殖的步驟包括：

步驟一：利用第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為23～25℃、濕度為50～65％的條件下，黑暗培養(yǎng)5～15天后給予1500～20001x光照繼續(xù)培養(yǎng)，15～25天得到初期綠蘿愈傷組織；

步驟二：將初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接于第二愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為25～28℃、濕度為50～65％條件下，暗培養(yǎng)一周后給予光照條件20001x，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成。

在某些實(shí)施方式中，所述綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段；小段的長(zhǎng)度為2～3cm；常規(guī)消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10～15分鐘。

本發(fā)明提供的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的有益效果是：愈傷組織一方面可研究植物生長(zhǎng)發(fā)育及分化的機(jī)制、遺傳變異規(guī)律，對(duì)植物遺傳育種具有特殊意義。

另一方面可用于大規(guī)模工廠化生產(chǎn)有用化合物，或用于細(xì)胞培養(yǎng)篩選工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥生產(chǎn)上有用的無性系，或用于原生質(zhì)體培養(yǎng)中的原生質(zhì)體來源等。實(shí)踐證明，愈傷組織培養(yǎng)不僅是一種植物快繁的新手段，同時(shí)也是植物改良，種質(zhì)保存和有用化合物生產(chǎn)的理想途徑。本發(fā)明利用愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行綠蘿的生產(chǎn)，通過組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)綠蘿頂芽或帶節(jié)莖段進(jìn)行培養(yǎng)與快速繁殖，繁育處的綠蘿種苗品質(zhì)優(yōu)良，為綠蘿規(guī)?；a(chǎn)提供了較好的技術(shù)支持。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組織培養(yǎng)的綠蘿無菌苗，可大量節(jié)約母本地，縮短生產(chǎn)周期，避免或減小天氣等不良因素引起的病蟲害。

同時(shí)，以該愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)綠蘿頂芽或帶節(jié)莖段為繁殖材料更容易誘導(dǎo)成功。

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、瓊脂粉，以及基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基。

其中，6-芐氨基腺嘌呤有味6-BA。是人工合成的細(xì)胞分裂素。6-BA具有抑制植物葉內(nèi)葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解，保綠防老；將氨基酸、生長(zhǎng)素、無機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能。

其中，萘乙酸(1-NapHthaleneacetic acid)，簡(jiǎn)稱NAA。萘乙酸是促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，也是萘乙酰胺的中間體。萘乙酸具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根，增加坐果，防止落果，改變雌、雄花比率等。萘乙酸可經(jīng)葉片、樹枝的嫩表皮、種子進(jìn)入到植物體內(nèi)，隨同營(yíng)養(yǎng)流輸導(dǎo)到作用部位。通常用于小麥、水稻、棉花、茶、桑、番茄、蘋果、瓜類、馬鈴薯、林木等，是一種良好的植物生長(zhǎng)刺激素。

其中，蔗糖為細(xì)胞的分裂、擴(kuò)大、增至提供必要的能量。

瓊脂粉是從植物里提取出來的藻膠。瓊脂因?yàn)橛刑厥獾哪z凝性質(zhì)，尤其有顯著的穩(wěn)固性、滯度和滯后性，并且易吸收水分，有特殊的穩(wěn)定效應(yīng)；具有增量劑、增稠劑、乳化劑、膠凝劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、助懸劑、水分保持劑等功效。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、6-糠基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂粉，以及第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基。

其中，吲哚丁酸促進(jìn)植物主根生長(zhǎng)，提高發(fā)芽率，成活率。用于促使插條生根。

吲哚丁酸可以作為植物主根生長(zhǎng)促進(jìn)劑，常用于木本和草本植物的浸根移栽，硬枝桿插，能加速根的生長(zhǎng)，提高植物生根的百分率，也可用于植物種子的浸種和拌種，可提高發(fā)芽率和成活率。高濃度吲哚丁酸也可促進(jìn)部分組培苗的增殖。

綜上所述，本發(fā)明提供的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基其具有上述諸多的優(yōu)點(diǎn)及價(jià)值，并在同類產(chǎn)品中未見有類似的方法公開發(fā)表或使用而確屬創(chuàng)新，產(chǎn)生了好用且實(shí)用的效果，較現(xiàn)有的技術(shù)具有增進(jìn)的多項(xiàng)功效，從而較為適于實(shí)用，并具有廣泛的產(chǎn)業(yè)價(jià)值。

附圖說明

應(yīng)當(dāng)理解的是，以下附圖僅示出了本申請(qǐng)的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對(duì)范圍的限定，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為誘導(dǎo)出的綠蘿莖段膨大體；

圖2為誘導(dǎo)出的綠蘿愈傷組織。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。

但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施的限制。

提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、蔗糖、瓊脂粉，以及第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.5-5.8；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/4，微量元素為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

上述，需要理解的是，MS培養(yǎng)基為組織的生長(zhǎng)提供所需的碳源,氮源,水,無機(jī)物和生長(zhǎng)因子。

可以理解的是，6-芐氨基腺嘌呤有味6-BA。是人工合成的細(xì)胞分裂素。6-BA具有抑制植物葉內(nèi)葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解，保綠防老；將氨基酸、生長(zhǎng)素、無機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能。

可以理解的是，萘乙酸(1-NapHthaleneacetic acid)，簡(jiǎn)稱NAA。萘乙酸是促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，也是萘乙酰胺的中間體。萘乙酸具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根，增加坐果，防止落果，改變雌、雄花比率等。萘乙酸可經(jīng)葉片、樹枝的嫩表皮、種子進(jìn)入到植物體內(nèi)，隨同營(yíng)養(yǎng)流輸導(dǎo)到作用部位。通常用于小麥、水稻、棉花、茶、桑、番茄、蘋果、瓜類、馬鈴薯、林木等，是一種良好的植物生長(zhǎng)刺激素。

可以理解的是，蔗糖為細(xì)胞的分裂、擴(kuò)大、增至提供必要的能量。

可以理解的是，瓊脂粉是從植物里提取出來的藻膠。瓊脂因?yàn)橛刑厥獾哪z凝性質(zhì)，尤其有顯著的穩(wěn)固性、滯度和滯后性，并且易吸收水分，有特殊的穩(wěn)定效應(yīng)；具有增量劑、增稠劑、乳化劑、膠凝劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、助懸劑、水分保持劑等功效。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖20-30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：將6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉分別滅菌，3-5℃保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟二：第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基溶解，加入6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、蔗糖、噻苯隆、2,4-二氯苯氧乙酸、瓊脂粉溶液，制得愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

步驟三：將定容好的的培養(yǎng)基PH調(diào)到5.5-5.8。

步驟四：將配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行高溫滅菌，制得第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述步驟一中的滅菌方法為抽濾滅菌或高溫滅菌；滅菌完成后20-25℃放置。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述步驟三中高溫滅菌的溫度為121℃，滅菌時(shí)間為30min。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料包括6-芐氨基腺嘌呤、6-糠基氨基嘌呤、萘乙酸、吲哚丁酸、水解酪蛋白、蔗糖、瓊脂粉，以及第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.5-5.8；

第二基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：1～5mg/L、3～6mg/L、0.5～2mg/L、0.5～3mg/L，并添加精氨酸100mg/L、天冬氨酸50mg/L、谷氨酸200mg/L。

上述，可以理解的是，吲哚丁酸促進(jìn)植物主根生長(zhǎng)，提高發(fā)芽率，成活率。用于促使插條生根。

吲哚丁酸可以作為植物主根生長(zhǎng)促進(jìn)劑，常用于木本和草本植物的浸根移栽，硬枝桿插，能加速根的生長(zhǎng)，提高植物生根的百分率，也可用于植物種子的浸種和拌種，可提高發(fā)芽率和成活率。高濃度吲哚丁酸也可促進(jìn)部分組培苗的增殖。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述6-芐氨基腺嘌呤的濃度為3.0mg/L、6-糠基氨基嘌呤0.1mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1mg/L、蔗糖20-30g/L、萘乙酸0.2mg/L、瓊脂粉7g/L。

本發(fā)明還提供了一種愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的使用方法：將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段，將其接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)形成愈傷組織后接種于愈傷組織的繼代培養(yǎng)基中增殖獲得致密愈傷組織。

上述，愈傷組織一方面可研究植物生長(zhǎng)發(fā)育及分化的機(jī)制、遺傳變異規(guī)律，對(duì)植物遺傳育種具有特殊意義。

另一方面可用于大規(guī)模工廠化生產(chǎn)有用化合物，或用于細(xì)胞培養(yǎng)篩選工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥生產(chǎn)上有用的無性系，或用于原生質(zhì)體培養(yǎng)中的原生質(zhì)體來源等。實(shí)踐證明，愈傷組織培養(yǎng)不僅是一種植物快繁的新手段，同時(shí)也是植物改良，種質(zhì)保存和有用化合物生產(chǎn)的理想途徑。本發(fā)明利用愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行綠蘿的生產(chǎn)，通過組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)綠蘿頂芽或帶節(jié)莖段進(jìn)行培養(yǎng)與快速繁殖，繁育處的綠蘿種苗品質(zhì)優(yōu)良，為綠蘿規(guī)?；a(chǎn)提供了較好的技術(shù)支持。

需要理解的是，組織培養(yǎng)的綠蘿無菌苗，可大量節(jié)約母本地，縮短生產(chǎn)周期，避免或減小天氣等不良因素引起的病蟲害。

同時(shí)，以該愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)綠蘿頂芽或帶節(jié)莖段為繁殖材料更容易誘導(dǎo)成功。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述誘導(dǎo)增殖的步驟包括：

步驟一：利用第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為23～25℃、濕度為50～65％的條件下，黑暗培養(yǎng)5～15天后給予1500～20001x光照繼續(xù)培養(yǎng)，15～25天得到初期綠蘿愈傷組織；

步驟二：將初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接于第二愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為25～28℃、濕度為50～65％條件下，暗培養(yǎng)一周后給予光照條件20001x，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成。

在本發(fā)明實(shí)施例中，所述綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成小段；小段的長(zhǎng)度為2～3cm；常規(guī)消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10～15分鐘。

為了便于理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。申請(qǐng)人聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，即不意味著本發(fā)明應(yīng)依賴上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)增殖的步驟包括：將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成2cm小段，常規(guī)消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10分鐘；

步驟一：利用第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為23℃、濕度為50％的條件下，黑暗培養(yǎng)10天后給予1500x光照繼續(xù)培養(yǎng)，20天得到初期綠蘿愈傷組織；

步驟二：將初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接于第二愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為25℃、濕度為50％條件下，暗培養(yǎng)一周后給予光照條件20001x，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成；

其中，第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中包括6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L，以及第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.5；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/4，微量元素為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：1mg/L、3mg/L、0.5mg/L、0.5mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

實(shí)施例2

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)增殖的步驟包括：將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成4cm小段，常規(guī)消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡10分鐘；

步驟一：利用第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為25℃、濕度為65％的條件下，黑暗培養(yǎng)15天后給予21000x光照繼續(xù)培養(yǎng)，25天得到初期綠蘿愈傷組織；

步驟二：將初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接于第二愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為28℃、濕度為65％條件下，暗培養(yǎng)一周后給予光照條件20001x，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成；

其中，第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中包括6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L，以及第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.8；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/4，微量元素為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：5mg/L、6mg/L、2mg/L、3mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。

實(shí)施例3

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)增殖的步驟包括：將綠蘿莖段消毒后在無菌條件下切割成3cm小段，常規(guī)消毒后用可溶性聚乙烯吡硌烷酮2g/L浸泡15分鐘；

步驟一：利用第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為25℃、濕度為65％的條件下，黑暗培養(yǎng)10天后給予2000lx光照繼續(xù)培養(yǎng)，25天得到初期綠蘿愈傷組織；

步驟二：將初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接于第二愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基在溫度為26℃、濕度為60％條件下，暗培養(yǎng)一周后給予光照條件2000lx，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成；

其中，第一愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中包括6-芐氨基腺嘌呤的濃度為2.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.2mg/L、蔗糖30g/L、瓊脂粉7g/L、噻苯隆0.1mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L，以及第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基pH值為5.8；

第一基礎(chǔ)培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整大量元素的含量為原量的1/4，微量元素為原量的1/2，調(diào)整肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸的含量分別為：3mg/L、4mg/L、1.5mg/L、1.5mg/L，并添加精氨酸50mg/L、天冬氨酸100mg/L、谷氨酸150mg/L。